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复方锁阳口服液对小鼠性激素水平及免疫功能的影响

复方锁阳口服液对小鼠性激素水平及免疫功能的影响

作者:刘如意1,刘敏2,任会勋1,刘洁1,黄思慧1,李彦霖1 作者单位:(1. 西安交通大学医学院免疫学与病原生物学系,陕西西安710061;2. 陕西中医学院临床医学系,陕西咸阳712000)

【摘要】 目的观察复方锁阳口服液对小鼠性激素水平的影响及其对免疫功能的调节作用,探讨其临床疗效机制。方法用复方锁阳口服液大(180mg/kg)、中(90mg/kg)剂量对小鼠灌胃4周后,用放射免疫法检测其对小鼠激素水平的影响,用MTT染色法、LDH释放法等检测其对小鼠相关免疫功能指标的影响。结果复方锁阳口服液大、中剂量灌胃给药均可显著提高雄性小鼠睾丸酮水平(P<0.05),对雌性小鼠孕激素和雌二醇有明显提高作用(P<0.05);对小鼠抗体产生、淋巴细胞转化以及NK细胞杀伤功能均有明显促进作用(P<0.05),大剂量优于小剂量。结论复方锁阳口服液能显著提高小鼠性激素水平,对小鼠免疫功能有明显促进作用。

【关键词】 复方锁阳口服液;小鼠;性激素;免疫

  ABSTRACT: ObjectiveTo observe the effects of Compound Cynomorium Songaricum Rupr Oral Liquid on sexual hormone level and immune functions in mice to investigate the mechanism of its clinical curative effect.MethodsCompound Cynomorium Songaricum Rupr Oral Liquid of large (180mg/kg) or medium (90mg/kg) dose was administered on mice by gastric lavage once a day for four weeks. Then its effect on sexual hormone levels in mice was tested by the radioimmunoassay method, while its effect on the mice immune function indexes was tested by MTT staining and LDH release methods.ResultsCompound Cynomorium Songaricum Rupr Oral Liquid in large and medium doses could significantly improve testosterone level of the male mice (P<0.05), and progesterone and estradiol levels in the female mice (P<0.05). It also obviously promoted the production of antibodies, lymphocyte transformation and NK cell killing function in mice (P<0.05); large doses worked better than smaller ones.ConclusionCompound Cynomorium Songaricum Rupr Oral Liquid can significantly improve sex hormone level and immune functions in mice.

  KEY WORDS: Compound Cynomorium Songaricum Rupr Oral Liquid; mouse; sexual hormone; immunity

复方锁阳口服液是根据名老中医王廷远验方研制而成。该药制剂主要有锁阳、枸杞子、五味子等组方经提取精制而成。根据传统中医理论,经大量临床病历验证,该方具有滋补、强壮、抗衰老等作用。但是,对其作用机制等知之甚少,并且对临床出现的一些意想不到的治疗效果无法解释。因此,本研究拟应用现代医学方法,从分子水平研究复方锁阳口服液对雄性小鼠睾丸酮和雌性小鼠雌二醇及孕激素水平及免疫功能的影响,为临床应用提供实验依据。

1材料与方法

1.1试剂及主要仪器复方锁阳口服液(每毫升相当于生药0.6g),由陕西关爱制药有限公司提供(批号:20081101)。迈普新(注射用胸腺肽α1),1.6mg/支,批号:050305,成都地奥集团有限公司提供。MTT、ConA均为美国Sigma公司产品。血清睾丸酮、雌二醇、孕酮放射免疫检测试剂盒购于美国DPC公司。岛津UV-2600型紫外可见分光光度计,Bio Teck全自动酶标仪、大容量冷冻离心机等。

1.2动物ICR品系小鼠,雌、雄各半,体重(19.3±0.8)g;绵羊、鸡等动物均由西安交通大学医学院实验动物中心提供,动物合格证号:4104035。

1.3小鼠分组及用药将小鼠分为8组,即雄性空白对照组、雌性空白对照组、雄性阳性对照组、雌性阳性对照组、雄性大剂量组、雄性小剂量组、雌性大剂量组、雌性小剂量组(n=10)。分组后使小鼠适应环境,第2天开始灌胃给药,空白对照组均用自来水灌胃;阳性组注射胸腺肽α1,剂量为200μg/kg,每周注射2次,连续4周;雌、雄大剂量组均按180mg/kg量用复方锁阳口服液灌胃,雌、雄小剂量组按90mg/kg量用复方锁阳口服液灌胃,均每日1次,连续4周。

1.4雄性小鼠睾丸酮和雌性小鼠雌二醇及孕酮的测定[1]小鼠用药4周后,眼球采血,分离血清,采用美国DPC,GAMBYT10探头γ记数器放免测定雄性小鼠睾丸酮T和雌性小鼠雌二醇及孕酮水平,由西安交通大学医学院检测中心协助完成。

1.5小鼠免疫功能的检测①血清溶血素的形成:于给药第1天,每鼠腹腔注射50g/L鸡红细胞混悬液0.2mL进行免疫,于最后1次给药后2h,小鼠眼眶取血分离血清,按常规方法[2]测定溶血素。②溶血空斑形成试验:小鼠免疫均同前,于最后1次给药后2h,将小鼠脱颈椎处死,解剖取出脾脏,将两个小鼠脾脏放在一起匀浆,按常规[3]测溶血空斑形成。③淋巴细胞增殖试验:按常规用ConA诱导,MTT染色法[4]测定。④NK细胞活性的测定:胞质乳酸脱氢酶(LDH)释放法[5](比色法)。

1.6统计学方法采用SPSS 13.0统计分析软件对所得数据进行统计学处理。计量资料采用均数±标准差(±s)表示,两组间比较经方差齐性检验后,采用t检验;相关性采用Spearman相关分析法。P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

2.1复方锁阳口服液对小鼠激素水平的影响

复方锁阳口服液灌胃4周能明显提高雄性小鼠睾丸酮的产生,与雄性空白对照组比较有显著差异(P<0.05);雌性小鼠血清孕酮和雌二醇的含量也明显提高,与雌性空白对照组相比有显著性差异(P<0.05,表1)。表1复方锁阳口服液对小鼠血清激素水平的影响

2.2复方锁阳口服液对小鼠溶血素形成和溶血空斑形成的影响复方锁阳口服液大、小剂量均提高了小鼠血清溶血素和溶血空斑形成数量,与空白对照组相比,有显著性差异(表2)。表2复方锁阳口服液对小鼠溶血素形成、溶血空斑形成的影响

2.3复方锁阳口服液对小鼠脾淋巴细胞增殖试验的影响复方锁阳口服液各剂量组对小鼠淋巴细胞转化功能有显著增强作用,有显著性差异(表3)。表3复方锁阳口服液对小鼠脾淋巴细胞转化能力的影响

2.4对小鼠NK细胞活性的影响复方锁阳口服液大剂量和小剂量均可提高小鼠NK细胞活性,与空白对照组相比有显著性差异(表4)。 表4复方锁阳口服液对小鼠NK细胞活性的影响

3讨论

锁阳,又名不老药,药物别名地毛球、锈铁棒、锁严子,属肉质寄生草本,寄生于白刺(泡泡刺)的根上。野生于沙漠戈壁,零下20℃生长最宜,生长之处不积雪、地不冻。主产于青海海西、甘肃河西走廊、内蒙阿拉善盟、新疆阿勒泰等地。先秦就有关于锁阳的文字记载,汉代始入药,为历代名医名案所珍重。《本草纲目》记载为“甘、温、无毒。大补阳气,益精血,利大便。

润燥养筋,治痿弱”。明代作家陶宗仪在他的《辍耕录》卷十描述为“鞑靼地野马或与蛟龙交,遗精人地。久之,发起如笋,上丰下俭,鳞甲栉比,筋脉连络,其形绝类男阴,名曰锁阳。即肉苁蓉之类。或谓里妇之淫者就合之,一得阳气,勃然怒长。土人掘取,洗涤去皮,薄切晒干,以充药货,功力百倍于苁蓉也。”《本草从新》:“益精兴阳,润燥养筋,治痿弱,滑大肠”。《本草图解》记载为“补阴益精,润燥养筋,凡大便燥结,腰膝软弱,珍为要药”。 《中药志》记载“补肾,滑肠,强腰膝。主治男子阳痿,女子不孕,血枯便秘,腰膝痿弱”。

现代医学研究表明[7]锁阳主要成分有锁阳含花色甙(anthocyanin)、三萜皂甙(triterpenoid saponins)、鞣质(tannin)、胡萝卜甙(daucosterol)、β-谷甾醇(β-sitosterol)、熊果酸(ursolic acid)、儿茶素(catechin)、没食子酸(gallic acid)。含挥发性成分, 其中含有22种化合物,主要成分为棕榈酸和油酸,其次含钾、钠、铁、锰、锌等15种元素及SO2-4、Cl-和PO3-4等离子,含有可溶性无机物总量约为生药量7%,也含有门冬氨酸、脯氨酸等15种氨基酸。

有实验表明[8],锁阳水煎剂给雄性正常小鼠和阳虚小鼠灌胃,10g/(kg·d),连续9d,可提高阳虚小鼠血液中糖皮质激素的浓度,且恢复至正常水平;但对正常小鼠血清皮质醇浓度无明显影响。还有报告指出[9],锁阳醇提取物给阳虚小鼠灌胃,可以恢复阳虚小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的能力,提高阳虚小鼠的脾脏淋巴细胞增殖功能。复方锁阳口服液的药理作用与各个单味药是否有相同的效应,还不清楚。

本研究观察了锁阳复方制剂对小鼠性激素分泌以及免疫功能的影响,以便探讨临床功效的作用机制。通过检测实验小鼠灌胃给药4周后雌性小鼠的雌、孕激素和雄性小鼠的睾丸激素,结果表明,复方锁阳口服液大、中剂量组的雄性小鼠睾丸酮的含量和雌性小鼠孕酮及雌二醇的血清含量均显著增高(P<0.01)。

进一步测定复方锁阳口服液对小鼠免疫功能的影响。结果发现,与对照组相比,复方锁阳口服液能显著提高实验小鼠血清抗体的含量,提高淋巴细胞增殖率,增强NK细胞杀伤活性(P<0.05)。此外,本实验还发现,用药组小鼠体格健壮、体重以及脏器大小明显高于对照组,提示复方锁阳口服液的滋补、强壮、抗衰老等临床功效与其对性激素的刺激分泌以及免疫增强作用有关。

【参考文献】

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\[3\]BIN HB, HAQUE R, PARVEZ S, et al. Immunomodulatory effects of fenugreek (Trigonella foenum graecum L) extract in mice \[J\]. Immunopharmacol, 2003, 3(2):257-265.

\[4\]张迅捷,陈冠敏,陈润. 紫菜多糖对小鼠免疫功能影响的研究 \[J\]. 现代预防医学, 2007, 34(14):601-603.

\[5\]陈奇. 中药药理研究方法学 \[M\]. 北京:人民卫生出版社, 2000:755-756.

\[6\]刘如意,任会勋,吴捷. 八正合剂抗感染作用及其作用机理探讨 \[J\]. 西北医学杂志, 2006, 21(3):113-115.

\[7\]罗军德,张汝学,贾正平. 锁阳抗应激药理作用及机理研究进展 \[J\]. 中药材, 2006, 29(7):744-746.

\[8\]黄霄檬. 锁阳脂肪酸组成成分的GC-MS分析 \[J\]. 甘肃科技, 2009, (5):42-43.

\[9\]聂莉莎,马丽杰,爱民. 锁阳药性及功能的现代研究进展 \[J\]. 中国民族民间医药, 2009, 16(9):65-66.